纯化抗体效价测定法

    1、当抗体浓度在5mg/ml以上，可用免疫双相扩散法测定抗体效价。

    2、当抗体浓度低于3mg/ml时，或者对应抗原为小分子（如生物素，地高辛等）时必须用ELISA法测定抗体活性，同上步骤。

操作步骤如下：

1、1%离子琼脂配制及倒板：

    称1g琼脂糖或日本琼脂粉，加入100ml 0.05U pH8.6巴比妥-HCL缓冲液中，水浴下加热至完全融化，取3ml倒在普通载玻片上（2.5×7cm）,待凝胶凝固后，放4℃存放20min以上可打孔使用。

    待用琼脂凝胶加入20mg NaN₃,混匀后3ml-分装于4℃保存备用。

2、打孔加样。

    用3mm打孔器打孔，孔径3mm，孔距3～5mm的梅花瓣孔图。注意不要把孔打裂，及漏底现象。

    当测抗体效价或活性时，抗体对倍稀释后加在四周孔，抗原加在中间孔，每孔10μl。

    各种IgG抗体，对应抗原可用正常血清1:40～50PBS稀释作抗原。

3、结果观察

加好样品的双扩板，放37℃温箱24～48小时，观察结果，**对着日光灯观察。**稀

释度抗体孔的沉淀线为抗体效价或活性。

琼脂双相扩散图

沉淀线随着抗体的稀释，逐渐靠近抗体孔边。

（五）单相免疫扩散法：参考“现代免疫化学技术”第185～187页

（六）免疫电泳法：参考“现代免疫化学技术”第52～62页

（七）免疫印迹技术参考“现代免疫化学技术”第83～87页。

（八）纯化抗体及免疫球蛋白IgG 的定量均采用紫外吸收公式计算   

                                                       IgG（或纯化抗体IgG）mg/ml=×稀释倍数

IgG消光系数=1cm光程，1mg/ml浓度0.01mol/L pH7.2PBS的OD吸收值。

不同血清IgG的消光系数为：羊IgG：1.30,兔IgG：1.35,人IgG：1.38,小鼠IgG：1.46,

大鼠IgG：1.45,马 IgG：1.50,猪 IgG：1.42,狗 IgG：1.58,鸡 IgG：1.77